Reagenti comuni nella coltura cellulare
Quando cellule o tessuti animali lasciano il corpo per essere coltivati al di fuori del corpo, è necessario fornire loro vari nutrienti necessari per la crescita e vari reagenti necessari per una migliore crescita cellulare in vitro. In questo numero presenterò brevemente alcuni componenti dei reagenti utilizzati nel processo di coltura cellulare e le loro funzioni.
1. Composizione del mezzo di coltura cellulare
(1). Terreno di coltura di base
I mezzi basali comuni includono principalmente MEM, DMEM e RPMI, che forniscono principalmente sistemi tampone tra cui glucosio, amminoacidi, acqua, oligoelementi e bicarbonato di sodio.
● Glutammina
È un amminoacido essenziale necessario per la crescita cellulare e partecipa alla sintesi proteica e al metabolismo degli acidi nucleici.
● Indicatore rosso fenolo
Un indicatore acido-base comunemente usato, mostra giallo quando è acido, rosso quando è neutro e viola quando è alcalino. Il rosso fenolo viene utilizzato come indicatore del valore di pH nel terreno.
● Sistema tampone carbonato/PH
Un sistema di tamponamento del pH fisiologico. A causa della produzione di acido durante il metabolismo cellulare, l'HCO3- nel terreno verrà gradualmente consumato, quindi la CO2 deve essere reintegrata in tempo per mantenere il pH entro un certo intervallo.
(2).Siero animale
Aggiungere il 2%-20% di siero al mezzo basale per formare un mezzo completo. Il siero non solo può fornire alle cellule i nutrienti di base necessari per la crescita, ma contiene anche componenti importanti coinvolti nel metabolismo cellulare come fattori di crescita, ormoni, oligoelementi e ioni.
(3). Antibiotici
Per evitare che le cellule vengano contaminate durante il processo di coltura, al terreno completo viene solitamente aggiunta una miscela di penicillina-streptomicina, cioè un doppio anticorpo. La penicillina è efficace principalmente contro i batteri Gram-positivi e la streptomicina è efficace contro molti batteri Gram-negativi. .
2. Tripsina-EDTA
La tripsina può idrolizzare la proteina tra le cellule e quindi separare le cellule. L'EDTA è un agente chelante chimico a bassa tossicità ed ha un discreto effetto sulle cellule aderenti. Quando i due vengono utilizzati in combinazione, l'efficienza delle celle di dispersione è maggiore. Questo passaggio è chiamato cellule digestive. Per celle diverse, ci sono requisiti diversi per la temperatura, il tempo e la concentrazione di tripsina quando viene utilizzata. Se la digestione è insufficiente, le cellule non possono essere digerite e una digestione eccessiva causerà danni cellulari. Poiché il siero nel terreno può ridurre l'attività della tripsina, il terreno completo viene solitamente utilizzato per terminare la digestione cellulare.
3. Tampone PBS
PBS è una soluzione salina tamponata con fosfato con equilibrio salino ed effetto tampone del pH regolabile. Viene generalmente utilizzato per lavare le cellule e mantenere la pressione osmotica cellulare.
4. Dimetilsolfossido (DMSO)
Un importante protettore cellulare penetrante e un componente importante nel fluido di crioconservazione cellulare. Durante il processo di crioconservazione delle cellule, il DMSO può penetrare rapidamente nella membrana cellulare ed entrare nella cellula, abbassare il punto di congelamento, ritardare il processo di congelamento, aumentare la concentrazione di ioni nella cellula, ridurre la formazione di cristalli di ghiaccio nella cellula e ridurre la cellula danno.
5. Inibitori del micoplasma
La contaminazione da micoplasma è una fonte comune di contaminazione nel processo di coltura cellulare. Tuttavia, gli inibitori del micoplasma possono essere utilizzati per eliminare il micoplasma nel fluido cellulare nella fase iniziale della contaminazione, in modo che l'esperimento possa continuare.
6. Colorante blu trypan
Un reagente di colorazione biologica comunemente usato per rilevare l'integrità della membrana cellulare. A causa della perdita di integrità della membrana cellulare e dell'aumentata permeabilità, le cellule morte possono essere colorate di blu con tripan blu, mentre le cellule vive non saranno colorate perché hanno membrane cellulari intatte che possono impedire al tripan blu di entrare nella cellula. Le cellule vive e morte possono essere distinte in base al colore delle cellule al microscopio, il che è conveniente per il conteggio delle cellule vive.
